免疫荧光染色实验

实验介绍

免疫荧光染色技术（IF）是标记免疫技术中发展最早的一种，利用特异性抗体与标记荧光染料结合，来检测和定位细胞中的特定蛋白质或其他分子。

应用

IF可用作免疫组织化学或免疫细胞化学中使用的传统显色标记的替代物。通过使用多种标记物的二级抗体，可以研究感兴趣蛋白的共定位，这是同时分析许多目标蛋白时的一个优势，可同时生成大量亚细胞定位的准确数据。

服务流程

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实验步骤：

① 复温复温：取出制作好的样本（短期存放-20℃，长期存放-80℃保存），恢复至室温后，用PBS洗涤三次，每次 5 分钟；

② 抗原修复：用0.01 M枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）充分浸泡样本，微波炉中低火加热修复，保持微沸状态5 min效果最好；

③ 破膜：用 0.5%Triton X-100 (PBS配制 ) 室温通透20 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

④ 封闭：封闭液蛋白的选择原则是与一抗蛋白和目标蛋白种属不同，将非特异性位点结合掉，从而保证后续荧光染色的特异性。

⑤ 一抗孵育：用抗体稀释液一抗稀释成目标比例，4℃过夜。

⑥ 一抗洗脱：第二天将湿盒拿出复温30 min,用PBS洗脱三次，每次5 min；

⑦ 荧光二抗：用抗体稀释液稀释荧光二抗，室温孵育2 h,注意避光;

⑧ 二抗洗脱：用PBS洗脱三次，每次洗脱时间可稍长一些；

⑨ 封片：用含防淬灭的甘油进行封片，按需可以对细胞核用 DAPI 进行染色；

⑩ 拍片：晾干片子后，置于显微镜下观察，获取荧光图像。

染色案例

小鼠胸腺组织染色

肌纤维染色

其他染色案例

服务承诺

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