免疫电镜技术

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免疫电镜技术

免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。

其原理是利用抗原抗体特异性结,在一张超薄切片上,用特异性一抗与待检测抗原结合,然后用带有胶体金标记的二抗与一抗抗原复合物结合。

在电子显微镜下观察,胶体金为黑色颗粒状物质,能清晰指示出相应抗原所在的部位,使得抗原和抗体定位的研究进入到亚细胞的水平。


服务流程




实验流程

① 取样固定

组织:取下后立即使用免疫电镜固定液,4℃保存或4°℃冰袋运输。在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

细胞、细菌:离心收集细胞或细菌沉淀,要求沉淀最少绿豆大小。加入免疫电镜固定液重悬混匀固定,4℃固定保存及运输。

样品固定后应尽快安排做后续包埋和免疫标记实验,减少抗原丢失的可能性。

免疫电镜固定液配制

1. 将600毫升蒸馏水放入微波炉加热至60°C;

2. 加入11.5 g Na2HPO4(无水)(MW: 141.96);

3. 加入40 g多聚甲醛(MW: 30.03),在60°C下摇匀。可能需要30分钟溶解;

4. 加入2.62 g NaH2PO4•H2O (MW: 137.99);

5. 将溶液过滤到Erlenmeyer烧瓶中,加入2ml饱和苦味酸(MW: 229.11);

6. 用蒸馏水配制1;

7. 冷却并保存在4°C直到使用;

使用前加入4 ml戊二醛(25%)


② 树脂包埋

清洗样本--琼脂包裹凝固--梯度酒精脱水--树脂渗透--纯树脂包埋--低温聚合

③ 超薄切片

超薄切片机切片50-80nm超薄切片,镀膜镍网捞片, 4℃保存。

④ 免疫标记

用特异性一抗与待检测抗原结合,然后用带有胶体金标记的二抗与一抗抗原复合物结合

⑤ 电镜拍照

上机观察(放大倍数0.2K-600K),根据实际情况选取合适倍数合适视野拍照。


拍照案例


小鼠神经胶质瘤细胞案例:



其他案例:



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