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蛋白质质谱送样要求是什么?
阅读:283次 更新时间:2024-05-10

样本类型

最低送样量

预处理及保存

胶点

2D 胶点

肉眼可见

用移液枪头将 2D 点挖下来,转入 EP 管中,做好标记,冰袋寄送

胶条

SDS-PAGE 条带

肉眼可见

将需要鉴定的 SDS-PAGE 条带切下,转入 EP 管中,做好标记,冰袋寄送

颜色非常浅的条带可取多个重复样本放一起

蛋白

冻干粉

50ug

样品转入 EP 管中,做好标记,冰袋寄送

蛋白溶液

20ug以上的蛋白量(且蛋白浓度不低于0.1 μg/μL

样品转入EP管中,做好标记,冰袋或干冰寄送

Buffer要求:溶液中不能含有Triton100NP40CHAPS等去垢剂

培养基

15 mL以上

1.     

培养基样本不含血清或添加人工生物营养素;

根据细胞或菌体的蛋白分泌和细胞状态确认收集持续时长;

培养基样本需要经过过滤去掉细胞成分;

500 g离心5分钟去掉原培养基,使用无血清培养基清洗细胞三遍,用无血清培养基培养细胞24 h以上;500 g离心5分钟收集培养基;使用0.22 μm的滤膜过滤去除细胞或菌体;液氮速冻,-80 ℃保存,干冰寄送。

动物组织

常规动物组织(心、肝、脾、肺、肾、肠、脑、肌

肉等)

100mg

PBS 洗涤去除残留血液和污染物,迅速剥去脂肪和筋皮等结缔组织,冲洗干净,用组织剪或手术刀将组织分离成 1cm3 左右的小块,液氮速冻,保存于-80

软骨组织

100mg

PBS 洗涤,用手术刀将软骨切成 1cm3 左右的小块,液氮速冻,保存于-80

软体动物(吸虫等)

100mg

PBS 洗涤去除来自宿主的污染,液氮速冻,保存于-80

植物组织

大本植物茎、叶、花等

200mg

PBS 清洗,吸水纸吸去表面液体,液氮速冻,保存于-80

大本植物树根、树皮、树枝等

200mg

PBS 清洗,吸水纸吸去表面液体,液氮速冻,保存于-80

种子

500mg

PBS 清洗,吸水纸吸去表面液体,液氮速冻,保存于-80

果肉

2g

去皮切成 1cm3 左右小块,液氮速冻,保存于-80

草本植物、藻类、蕨类等

200mg

PBS 清洗,吸水纸吸去表面液体,液氮速冻,保存于-80

花粉

200mg

植物开花期收集花粉,解剖显微镜下检查花粉,用解剖针去除花药碎片等杂质,转入 EP 管中,光学显微镜下检查花粉的形态和纯度,保存于-80

微生物

细菌类

200mg

3000rpm-5000rpm 离心 5-15min,去上清,PBS 洗涤沉淀三次,液氮速冻,保存于-80

真菌类(菌菇)

2g

PBS 清洗,吸水纸吸去表面液体,液氮速冻,保存于-80

细胞

悬浮培养细胞

10^6

400rpm-1000rpm 离心 10 分钟收获细胞,弃上清,用预冷的 PBS 小心洗涤片状沉淀物 2 次,置于冰上, 去上清,液氮速冻,保存于-80

贴壁培养细胞

10^6

1.弃掉培养液,并将培养皿倒置于吸水纸上吸干培养液;

2.加入 4预冷的 PBS,平放轻轻摇动 1 分钟洗涤细胞,然后弃去 PBS,重复以上操作两次以洗去培养液

3.将培养皿置于冰上,向培养皿内加入 4预冷的 PBS,用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧(动作要快),冰上斜置培养皿,使得缓冲液流向一侧,用移液管吸取溶解产物至预冷的离心管内,离心去上清。

4.液氮速冻,保存于-80

体液

血清

100ul

收集好的全血室温静置两小时,3000rpm 离心 10min,取上清,液氮速冻,保存于-80

血浆

100ul

收集好的全血加入抗凝剂,室温静止 30 分钟,1300rpm-2000rpm 离心 10min,取上清,液氮速冻,保存于-80

尿液

10ml

5000rpm      4°C 离心 30-60min,取上清, 保存于-80

唾液

1ml

禁食两小时以上,上午取样,1000rpm-2000rpm 离心 5min,(或使用 0.22μm 滤膜过滤,取上清,保

存于-80

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